将基因敲除杂合子小鼠雌雄互交，剪取子代小鼠尾尖，提取得到鼠尾组织基因组$\rm DNA$，（通过设计                 ，采用$\rm PCR$方法进行扩增并电泳，得到如图$\rm 1$结果。图$\rm 1$中$\rm WT$所对应的是野生型小鼠，$\rm KO$和$\rm HET$对应的分别是                 、                 。

将基因敲除杂合子小鼠雌雄互交，剪取子代小鼠尾尖，提取得到鼠尾组织基因组$\rm DNA$，通过设计特定的引物，采用$\rm PCR$方法进行扩增并电泳，得到如上图结果。结合图示的结果可以判断，图中$\rm WT$所对应的是野生型小鼠，$\rm DNA$均是$\rm 661bp$，$\rm KO$所对应的$\rm DNA$均是$\rm 200bp$，表示基因敲除纯合子，$\rm HET$对应的$\rm DNA$有两个电泳带，分别是$\rm 661bp$和$\rm 200bp$，表示基因敲除杂合子。

敲除基因的个体往往影响配子的存活率而影响子代及比例。科学家使用野生型（$\rm ++$）和基因敲除杂合子（$\rm +--$）分别作母本和父本进行杂交，结果如表。据此可知基因敲除杂合子（$\rm +--$）产生含有                （填“$\rm +$”或“$\rm -$”）的大部分                （填“雌”或“雄”）配子致死。基因敲除的杂合子雌雄个体相互交配，基因敲除纯合子的概率是                。

$\\rm -$

答：雄

答：$\\rm \\dfrac{1}{20}$

敲除基因的个体往往影响配子的存活率而影响子代及比例。科学家使用野生型（$\rm ++$）和基因敲除杂合子（$\rm +--$）分别作母本和父本进行杂交，结果如下表。根据表中结果可知基因敲除杂合子（$\rm +-$）产生含有“$\rm -$”的大部分“雄”配子致死，即只有$\rm \dfrac{1}{20}$的雄配子存活。则基因敲除的杂合子雌雄个体相互交配，基因敲除纯合子的概率是$\rm \dfrac{1}{2}\times\dfrac{1}{10}=\dfrac{1}{20}$。

敲除基因的纯合子往往生活力和繁殖力低，甚至会在胚胎期死亡，妨碍了对该基因在成年动物体内功能的研究。需要重新设计实验程序，使基因的敲除发生在成年动物特定组织和特定时间内。

①研究人员找到了一段被称为$\rm loxP$位点的$\rm DNA$序列，该序列是酶$\rm C$的作用位点，如图$\rm 2$所示，当基因$\rm X$位于                                时，在酶$\rm C$的作用下被敲除。

②采用基因工程等方法获得在某基因两侧插入$\rm loxP$序列的纯合小鼠$\rm A$。在未导入酶$\rm C$基因的情况下，小鼠$\rm A$的表现型与野生型小鼠                （选填“相同”或“不同”）。

③在肾脏集合管细胞中，$\rm AQP2$启动子特异性地与$\rm RNA$聚合酶结合并表达，现已获得另一种转纯合基因小鼠$\rm B$，在转入的                前插入$\rm AQP2$基因启动子序列，可以使酶$\rm C$在肾脏集合管处表达。

①两个方向相同的$\\rm 1oxP$位点之间； ②相同；③酶$\\rm C$基因

①研究人员找到了一段被称为$\rm loxP$位点的$\rm DNA$序列，该序列是酶$\rm C$的作用位点，如下圈所示，当基因$\rm X$位于两个方向相同的$\rm 1oxP$位点之间时，在酶$\rm C$的作用下被敲除，说明酶$\rm C$能切断磷酸二酯键。

②采用基因工程等方法获得在某基因两侧插入$\rm loxP$序列的纯合小鼠$\rm A$。在未导入酶$\rm C$基因的情况下，小鼠$\rm A$的表现型与野生型小鼠相同，因为题中的某基因没有被切除，因而和野生型相同。

③在肾脏集合管细胞中，$\rm AQP2$启动子特异性地与$\rm RNA$聚合酶结合井表达，现已获得另一种转纯合基因小鼠$\rm B$，在转入的酶$\rm C$基因前插入$\rm AQP2$基因启动子序列，则可以使酶$\rm C$在肾脏集合管处表达，进而实现相应基因的切除。

已知酶$\rm C$基因所在的染色体与$\rm loxP$序列所在染色体为非同源染色体、请利用$\rm AB$小鼠，设计杂交实验获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的纯合小鼠：                                                                                                                                  。

让小鼠$\\rm A$和$\\rm B$杂交，子代雌雄个体相互交配，获得$\\rm F_{2}$（通过 $\\rm PCR$扩增和核酸分子杂交等方法）鉴定并选择含有$\\rm loxP$序列和连接$\\rm AQP2$启动子的酶$\\rm C$基因的纯合子小鼠

已知酶$\rm C$基因所在的染色体与$\rm loxP$序列所在染色体为非同源染色体、请利用$\rm AB$小鼠，设计杂交实验获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的纯合小鼠：插入$\rm loxP$序列的小鼠$\rm A$相当于杂合子，基因型设为$\rm Aa$，连接$\rm AQP2$启动子的酶$\rm C$基因的小鼠$\rm B$相当于杂合子，基因型设为$\rm Bb$，即小鼠$\rm A$、$\rm B$的基因型为$\rm AaBB$和$\rm AABb$，要获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的小鼠即$\rm aabb$的纯合子，可将让小鼠$\rm A$和$\rm B$交，子代子代雌雄个体相互交配获得$\rm F_{2}$，通过$\rm PCR$扩增和核酸分子杂交等方法对$\rm F_{2}$代进行鉴定和选择，获得含有$\rm loxP$序列和连接$\rm AQP2$启动子的酶$\rm C$基因的纯合子小鼠。