$\rm PD-L1$能抑制$\rm T$细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。临床上可利用抗$\rm PD-1$的单克隆抗体进行癌症治疗，据图$\rm 1$推测，其原因是抗$\rm PD-1$的单克隆抗体与$\rm PD-1$的结合，阻断了                的结合，避免抑制$\rm T$细胞活化。

$\\rm PD-1$和$\\rm PD-L1$

癌细胞是由于原癌基因和抑癌基因发生突变导致遗传物质改变。图$\rm 1$中癌细胞表面的$\rm PD-L1$和$\rm T$细胞表面的$\rm PD-1$结合，抑制$\rm T$细胞的活化。$\rm PD-1$的单克隆抗体与$\rm PD-1$特异性结合，阻断了$\rm PD-L1$和$\rm PD-1$的结合，避免抑制$\rm T$细胞活化。

获得抗$\rm PD-1$的单克隆抗体的方法：将纯化的$\rm PD-1$蛋白注射到小鼠体内，提取小鼠的脾脏细胞，常用化学试剂                诱导其与骨髓瘤细胞融合，筛选后将所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如图$\rm 2$。

①在检测时需要将                固定于固相载体表面制成固相抗原，并加入待测样本。

②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与                结合的酶标抗体洗去，该检测方法中，酶标抗体的作用是                。

③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表                。

聚乙二醇（$\\rm PEG$）；$\\rm PD-1$；抗$\\rm PD-1$的单克隆抗体；抗体与待测抗原结合，酶催化特定底物反应；抗$\\rm PD-1$的单克隆抗体的量

诱导动物细胞融合的常用方法有聚乙二醇（$\rm PEG$）融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等，所以可用化学试剂聚乙二醇（$\rm PEG$）诱导其与骨髓瘤细胞融合；

①在检测时需要将$\rm PD-1$蛋白固定于固相载体表面制成固相抗原；

②加入酶标抗体后一段时间，为了排除干扰，则需要用洗涤剂将未与抗$\rm PD-1$抗体结合的酶标抗体洗去，该检测方法中，酶标抗体的作用是抗$\rm PD-1$的单克隆抗体的量；

③$\rm PD-1$蛋白与抗$\rm PD-1$抗体的结合量越多颜色越深，所以加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表与抗$\rm PD-1$抗体的量。

抗$\rm PD-1$的单克隆抗体对一些肿瘤无效。$\rm CD28$是$\rm T$细胞表面受体，$\rm T$细胞的有效激活依赖于$\rm CD28$在癌细胞与$\rm T$细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合$\rm PSMA$，还能结合$\rm CD28$的双特异性抗体$\rm PSMA\times CD28$，诱导$\rm T$细胞定向杀伤癌细胞，如图$\rm 3$。制备过程为：先将                分别注射到小鼠体内，分离出$\rm B$淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导其融合，并置于含有                混合气体的                （仪器）中培养，以获得更多双杂交瘤细胞。通过进一步筛选，获得所需的双特异性抗体。

$\\rm PSMA$、$\\rm CD28$；$\\rm 95\\%$空气和$\\rm 5\\%CO_{2}$；$\\rm CO_{2}$培养箱

抗体具有特异性，所以为了获取既能结合$\rm PSMA$，还能结合$\rm CD28$的双特异性抗体$\rm PSMA\times CD28$，则需要先将$\rm PSMA$、$\rm CD28$（相当于抗原）分别注射到小鼠体内对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾脏中再分离出能产生特定抗体的$\rm B$淋巴细胞，再诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，用特定选择培养基筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合，为获得更多双杂交瘤细胞，需将双杂交瘤细胞置于动物细胞培养的$\rm CO_{2}$培养箱中培养，其中含有$\rm 95\%$空气和$\rm 5\%CO_{2}$ ，再通过进一步筛选，获得所需的双特异性抗体 。