在$\rm CRISPR-Cas12a$系统中，$\rm crRNA$的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域最多含                 种核苷酸；细菌细胞中的                 也能起到类似$\rm Cas12a$蛋白的作用。若要将$\rm KIFCI$基因从目标$\rm DNA$上剪切下来，需要设计                 种$\rm crRNA$。

在$\rm CRISPR-Cas12a$系统中，$\rm crRNA$的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域既有$\rm DNA$也有$\rm RNA$，故最多有$\rm 8$种核苷酸（$\rm 4$种脱氧核苷酸和$\rm 4$种核糖核苷酸）；$\rm Cas12a$蛋白可以到相应位置剪切$\rm DNA$，其作用相当于限制酶；若要将$\rm KIFCI$基因从目标$\rm DNA$上剪切下来，需要有两个切口，而$\rm crRNA$的识别具有特异性，故需要$\rm 2$种$\rm crRNA$。

为保证目的基因与$\rm PX458$质粒正确连接，在扩增目的基因时，应在引物端加入相应的限制酶序列，其中$\rm P1$的碱基序列为$\rm 5^\prime\ CAGCTGCTC3^\prime$。采用$\rm PCR$技术对一个$\rm DNA$进行扩增时，第$\rm n$次循环共需要引物                 个。

一个$\rm DNA$分子有两条链，第$\rm n$次复制形成$\rm 2^{n}$个$\rm DNA$，相当于新合成$\rm 2^{n-1}$个$\rm DNA$分子，合成一个$\rm DNA$分子需要两个引物，因此需要的引物数目为$\rm 2^{n-1}\times 2=2^{n}$个。

在目的基因与$\rm PX458$质粒连接时，可用                 （填“  $\rm E.coliDNA$连接酶”或“$\rm T_{4}DNA$连接酶”）进行连接。

$\rm T_{4}DNA$连接酶可连接黏性末端和平末端，故在目的基因与$\rm PX458$质粒连接时，可用$\rm T_{4}DNA$连接酶连接。

将$\rm crRNA-Cas12a$重组载体成功转染至$\rm HeLa$细胞，与对照组相比，实验组中$\rm KIFCl$蛋白表达量如图$\rm 2$所示，细胞数目的变化如图$\rm 3$所示，由此可得出的结论是                                                  ，判断依据是                                                                                  。

$\\rm KIFC1$基因可以促进$\\rm HeLa$细胞的增殖；敲除细胞株中$\\rm KIFC1$蛋白表达量明显下降，证明$\\rm HeLa$细胞$\\rm KIFC1$基因敲除成功：$\\rm KIFCl$敲除组细胞数目显著低于对照组，表明$\\rm KIFC1$敲除可使$\\rm HeLa$细胞增殖能力下降

结合图示可知，敲除细胞株中$\rm KIFC1$蛋白表达量明显下降，证明$\rm HeLa$细胞$\rm KIFC1$基因敲除成功：$\rm KIFCl$敲除组细胞数目显著低于对照组，表明$\rm KIFC1$敲除可使$\rm HeLa$细胞增殖能力下降，据此可知，$\rm KIFC1$基因可以促进$\rm HeLa$细胞的增殖。