从患者体内分离的$\rm T$淋巴细胞，需要对其进行基因工程改造，以得到$\rm CAR-T$细胞。

①基因工程最核心的步骤是                。

②构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间。启动子的作用是                                                                。

③可以通过$\rm PCR$技术获得大量目的基因，利用该技术时扩增目的基因时每次循环可分为                三步，其中第三步所使用的酶是                                                                。

基因表达载体的构建；$\\rm RNA$聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录出$\\rm mRNA$；变性、复性、延伸；耐高温的$\\rm DNA$聚合酶（$\\rm Taq$酶）

①基因表达载体的构建是基因工程最核心的步骤；

②启动子是一段有特殊序列结构的$\rm DNA$片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是$\rm RNA$聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出$\rm mRNA$，最终表达出人类需要的蛋白质；

③$\rm PCR$技术每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步，延伸时需要加入耐高温的$\rm DNA$聚合酶（$\rm Taq$酶）。

体外培养患者$\rm CAR-T$细胞时，不仅要确保                的环境条件，还要定期更换培养液，这样做的目的是                                                                。

无菌、无毒；清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害

构建好的$\rm CAR-T$细胞扩增时，不仅要确保无菌、无毒的环境条件，还需要定期更换培养液，这样做的目的是清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害。

结合题干信息分析，$\rm CAR-T$疗法价格高昂的原因可能是                                                                （答出$\rm 2$点即可）。

是因为它需要给每个癌症患者进行“量身定制”，不能批量化生产降低成本；

需要借助基因工程和动物细胞培养技术，技术要求高且容易失败。

根据材料可知，每个患者进行$\rm CAR-T$疗法都要使用自身的$\rm T$淋巴细胞，进行专门改造，无法批量化生产来降低成本；$\rm CAR-T$疗法需要借助基因工程和动物细胞培养技术，技术要求高且容易失败。