从病人体内取出某组织，分离得到成纤维细胞，一般需要用                酶处理组织块，分散成单个细胞进行培养，需提供的混合气体环境为                。

胰蛋白酶或胶原蛋白；$\\rm 95\\%$空气和$\\rm 5\\%$的$\\rm CO_{2}$

将动物组织处理为细胞通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理；动物细胞培养所需的气体条件是$\rm 95\%$空气（细胞代谢必需的）和$\rm 5\%$的$\rm CO_{2}$（维持培养液的$\rm pH$）。

本实验中逆转录病毒的作用是                                                                。

作为运载体将外源基因送入小鼠成纤维细胞

本实验中，逆转录病毒是载体，能将外源基因$\rm Oct3/4$、$\rm Sox2$、$\rm c-Myc$和$\rm Klf4$送入小鼠成纤维细胞。

获取目的基因可通过$\rm PCR$进行，$\rm PCR$反应体系中加入                 离子作为$\rm Taq$酶的激活剂；$\rm PCR$程序中引物的$\rm GC$含量越高，复性所需温度一般越                 （“高”、“低”）。

$\rm PCR$反应体系中加入$\rm Mg^{2+}$作为$\rm Taq$酶的激活剂；由于$\rm G$和$\rm C$之间有$\rm 3$个氢键，故引物的$\rm GC$含量越高，结合特异性越强，复性所需温度越高。

如果要了解$\rm Oct3/4$、$\rm Sox2$、$\rm c-Myc$和$\rm Klf4$基因在诱导$\rm iPS$细胞时，每个基因作用的相对大小，请简要说明实验设计思路                                                                。

依次去掉$\\rm 1$个基因，将其他$\\rm 3$个基因转入小鼠成纤维细胞中，通过与转入$\\rm 4$个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的基因对诱导$\\rm iPS$细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小

可用减法原理验证$\rm Oct3/4$、$\rm Sox2$、$\rm c-Myc$和$\rm Klf4$基因在诱导$\rm iPS$细胞时，每个基因作用的相对大小，在导入基因时：依次去掉某个特定的基因，只导入其他$\rm 3$个基因到小鼠成纤维细胞中，通过与转入$\rm 4$个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的基因对诱导$\rm iPS$细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小。